Labelfree非標記定量

服務介紹：

　　蛋白質組學(Proteomics)指的是大規(guī)模、高通量地研究一個細胞、組織或物種中表達的全套蛋白質的學科。近十年來，質譜技術的飛速發(fā)展大大推動了的蛋白質組學的進步，基于質譜的蛋白質組學已經(jīng)成為蛋白質研究領域的技術手段。通過蛋白質組學技術可以對生物樣本中的蛋白質、翻譯后修飾位點(如磷酸化)進行大規(guī)模地鑒定或定量，進而從高通量的數(shù)據(jù)分析中挖掘有價值的信息和規(guī)律，為功能機制的探究提供線索和基礎。2003年，人類基因組計劃(HGP)完成精細圖的繪制后，同年，人類蛋白質組學計劃(HPP)隨即開展起來，反映了科研領域對蛋白質組學的重視。經(jīng)過十年時間，多家單位的共同努力下，人類蛋白質組草圖也于2014年在Nature雜志公布了。

　　蛋白質非標記定量技術(Label-Free)是通過液質聯(lián)用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析，無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做內部標準，只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質時所產(chǎn)生的質譜數(shù)據(jù)，比較不同樣品中相應肽段的信號強度，從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。其原理是通過比較質譜分析次數(shù)或質譜峰強度來分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化，其認為肽段在質譜中被捕獲檢測的頻率與其在混合物中的豐度成正相關，因此蛋白質被質譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質的豐度，通過適當?shù)臄?shù)學公式可以將質譜檢測計數(shù)與蛋白質的量聯(lián)系起來，從而對蛋白質進行定量。

　　Label-Free定量技術常用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組各類樣品中蛋白質表達水平的差異，發(fā)現(xiàn)生物標記物等。

　　實驗流程：

　　蛋白提取—蛋白酶解—肽段富集—高分辨質譜檢測采集數(shù)據(jù)—數(shù)據(jù)庫檢索—數(shù)據(jù)分析

　　送樣運輸要求：

　　1、蛋白樣本

　?、俚鞍琢看笥?00ug，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　?、诮ㄗh測定蛋白濃度后，液氮速凍，避免蛋白降解，另外需要告知蛋白溶液的緩沖液成分和濃度，方便實驗室收到后進行后續(xù)處理。

　?、勰z條、膠點樣本不建議進行定量蛋白質組學。

　　2、細胞樣本

　?、偌毎?x10⁷個，收集細胞沉淀，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　?、谑占瘯r，用預冷PBS緩沖液清洗三次，去除培養(yǎng)基成分，然后離心去除上清保存。

　　3、血清樣本

　?、贅颖玖?00uL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　?、跇颖緫M量避免溶血。

　　4、血漿樣本

　?、贅颖玖?00uL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②樣本應盡量避免溶血。

　　5、尿液樣本

　?、贅颖玖?mL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　?、跇悠窇M量避免帶入糞便殘渣。

　　6、動物組織樣本

　?、贅颖玖?00mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②收集時，用預冷PBS緩沖液沖洗表面血液，并用濾紙吸干多余水分，避免凍存時結冰。

　　③固定液浸泡過的樣本無法進行檢測。

　　7、植物組織樣本

　?、贅颖玖?00mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　?、谑占瘯r，用預冷PBS緩沖液沖洗表面泥沙，并用濾紙吸干多余水分，避免凍存時結冰。

　?、酃潭ㄒ航葸^的樣本無法進行檢測。

　　8、微生物樣本

　?、贅颖玖扛芍?00mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復凍融。

　　②收集時，用預冷PBS緩沖液清洗三次，去除培養(yǎng)基成分，然后離心去除上清保存。

Labelfree非標記定量