甲狀腺球蛋白放免檢測(cè)基本信息簡(jiǎn)介
甲狀腺球蛋白是甲狀腺濾泡上皮分泌的660 ku糖蛋白，每個(gè)Tg約有2個(gè)甲狀腺素（T4）和0.5個(gè)三碘甲腺原氨酸（T3）分子，儲(chǔ)存在濾泡腔中。溶酶體水解Tg表面T4、T3并使之釋放入血，同時(shí)少量的Tg也釋放入血，部分Tg經(jīng)甲狀腺淋巴管分泌入血。血循環(huán)中的Tg被肝臟的巨噬細(xì)胞清除。甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin，Tg)，是甲狀腺濾泡上皮分泌的660 ku糖蛋白，每個(gè)Tg約有2個(gè)甲狀腺素(T4)和0.5個(gè)三碘甲腺原氨酸(T3)分子，儲(chǔ)存在濾泡腔中。溶酶體水解Tg表面T4、T3并使之釋放入血，同時(shí)少量的Tg也釋放入血，部分Tg經(jīng)甲狀腺淋巴管分泌入血。血循環(huán)中的Tg被肝臟的巨噬細(xì)胞清除。分泌因素，刺激Tg的分泌因素包括促甲狀腺素(TSH)和胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1);抑制因子是γ-干擾素、α-腫瘤壞死因子和維甲酸。Tg的分泌率為100 mg/(60。
甲狀腺球蛋白放免檢測(cè)如何操作
實(shí)驗(yàn)開始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
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